食品中铅的应用方案（二硫腙比色法）
食品中铅的应用方案（二硫腙比色法）
原理
样品经消化后，在pH 8.5～9.O时，铅离子与二硫腙生成红色络合物，溶于三氯甲烷。加入柠檬酸铵、氰化钾和盐酸羟胺等，防止铁、铜、锌等离子干扰，与标准系列比较定量。
仪器及试剂
所用玻璃仪器均用硝酸(10％～20％)浸泡24 h以上，用自来水反复冲洗，最后用去离子水冲洗干净。
(1)氨水(1+1)
(2)盐酸(1+1)：量取100 mL盐酸，加入100 mL水中。
(3)酚红指示液(1 g/L)：称取O.10 g酚红，用少量多次乙醇溶解后移入100 ml。容量瓶中并定容至刻度。
(4)盐酸羟胺溶液(200 g/L)：称取20 g盐酸羟胺，加水溶解至50 mL，加2滴酚红指示液，加氨水(1+1)，调pH至8.5～9.0(由黄变红，再多加2滴)，用二硫腙一三氯甲烷溶液提取至三氯甲烷层绿色不变为止，再用三氯甲烷洗二次，弃去三氯甲烷层，水层加盐酸(1+1)呈酸性，加水至100 mL。
(5)柠檬酸铵溶液(200 g/L)：称取50 g柠檬酸铵，溶于100 mL水中，加2滴酚红指示液，加氨水(1+1)，调pH至8.5～9.0，用二硫腙一三氯甲烷溶液提取数次，每次10-20 mL，至三氯甲烷层绿色不变为止，弃去三氯甲烷层，再用三氯甲烷洗二次，每次5 mL，弃去三氯甲烷层，加水稀释至250 mL。
(6)氰化钾溶液(100 g/L)：称取10.0 g氰化钾，用水溶解后稀释至100 mL。
(7)三氯甲烷：不应含氧化物。
①检查方法：量取10 mL三氯甲烷，加25 mL新煮沸过的水，振摇3min，静置分层后，取10 mL水液，加数滴碘化钾溶液(100 g／L)及淀粉指示液，振摇后应不显蓝色。
②处理方法：于三氯甲烷中加入1／20～1／10体积的硫代硫酸钠溶液(200 g／L)洗涤，再用水洗后加入少量无水氯化钙脱水后进行蒸馏，弃去最初及最后的1／lO馏出液，收集中间馏出液备用。
(8)淀粉指示液：称取0.5 g可溶性淀粉，加5 mL水搅匀后，慢慢倒入100mL沸水中，随倒随搅拌，煮沸，放冷备用。临用时配制。
(9)硝酸(1+99)：量取1 mL硝酸，加入99 mL水中。
(10)二硫腙一三氯甲烷溶液(0.5 g/L)：保存冰箱中，必要时用下述方法纯化。
称取0.5 g研细的二硫腙，溶于50 mL三氯甲烷中，如不全溶，可用滤纸过滤于250 mL分液漏斗中，用氨水(1+99)提取三次，每次100 mL，将提取液用棉花过滤至500 mL，合并三氯甲烷层，用等量水洗涤二次，弃去洗涤液，在50℃水浴上蒸去三氯甲烷。精制的二硫腙置硫酸干燥器中，干燥备用。或将沉淀出的二硫腙用200 mL，200 mL，100 mL三氯甲烷提取三次，合并三氯甲烷层为二硫腙溶液。
(11)二硫腙使用液：吸取1.0 mL二硫腙溶液，加三氯甲烷至10 mL混匀。用1cm比色杯，以三氯甲烷调节零点，于波长510 nm处测吸光度(A)，用下式算出配制100 mL二硫腙使用液(70％透光率)所需二硫腙溶液的毫升数(V)。
V=10*(2-lg70)/A=1.55/A
(12)硝酸一硫酸混合液(4+1)。
(13)铅标准溶液：精密称取0.1598 g硝酸铅，加10 mL硝酸(1+99)，全部溶解后，移入100 mL容量瓶中，加水稀释至刻度。此溶液每毫升相当于1.0mg铅。
(14)铅标准使用液：吸取1.0 mL铅标准溶液，置于100 mL容量瓶中，加水稀释至刻度。此溶液每毫升相当于10.0ug铅。
分析步骤
样品预处理
(1)在采样和制备过程中，应注意不使样品污染。
(2)粮食、豆类去杂物后，磨碎，过20目筛，贮于塑料瓶中，保存备用。
(3)蔬菜、水果等水分含量高的鲜样，用食品加工机或匀浆机打成匀浆，贮于塑料瓶中，保存备用。
样品消解(可根据实验室条件选用以下任何一种方法消解)
(1)压力消解罐消解法：称取1.00～2.00 g样品(干样、含脂肪高的样品<1.00g，鲜样<2.0 g或按压力消解罐使用说明书称取样品)于聚四氟乙烯内罐，加硝酸2～4 mL浸泡过夜。再加过氧化氢(30％)2～3mL(总量不能超过罐容积的1/3)。盖好内盖，旋紧不锈钢外套，放入恒温干燥箱，120～140℃保持3～4 h，在箱内自然冷却至室温，用滴管将消化液洗入或过滤入(视消化后样品的盐分而定)10～25 mL容量瓶中，用水少量多次洗涤罐，先液合并于容量瓶中并定容至刻度，混匀备用；同时做试剂空白实验。
(2)湿式消解法：称取样品1.00～5.00 g于三角瓶或高脚烧杯中，放数粒玻璃珠，加10 mL混合酸(或再加1～2 mL硝酸)，加盖浸泡过夜，加一小漏斗电炉上消解，若变棕黑色，再加混合酸，直至冒白烟，消化液呈无色透明或略带黄色，放冷用滴管将样品消化液洗人或过滤入(视消化后样品的盐分而定)10～25 mL容量瓶中，用水少量多次洗涤三角瓶或高脚烧杯，洗液合并于容量瓶中并定容至刻度，混匀备用；同时做试剂空白实验。
(3)灰化法
①粮食及其他含水分少的食品：称取5.00 g样品，置于石英或瓷坩埚中，加热至炭化，然后移入马弗炉中，500℃灰化3 h，放冷，取出坩埚，加硝酸(1+1)，润湿灰分，用小火蒸干，在500℃灼烧1 h，放冷，取出坩埚。加1 mL硝酸(1+1)，加热，使灰分溶解，移入50 mL容量瓶中，用水洗涤坩埚，洗液并入容量瓶中，加水至刻度，混匀备用。
②含水分多的食品或液体样品：称取5.0g或吸取5.00mL样品，置于蒸发皿中，先在水浴上蒸干，加热至炭化，然后移入马弗炉中，500 ℃灰化3 h，放冷，取出坩埚，加硝酸(1+1)，润湿灰分，用小火蒸干，在500℃灼烧1 h，放冷，取出坩埚。加1 mL硝酸(1+1)，加热，使灰分溶解，移入50 mL容量瓶中，用水洗涤坩埚，洗液并入容量瓶中，加水至刻度，混匀备用。
测定
吸取10.0 mL消化后的定容溶液和同量的试剂空白液，分别置于125 mL分液漏斗中，各加水至20 mL。
吸取0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.50 mL铅标准使用液(相当0、1、2、3、4、5µg铅)，分别置于125 mL分液漏斗中，各加1 mL硝酸(1+99)至20 mL。于样品消化液、试剂空白液和铅标准液中各加2 mL柠檬酸铵溶液(20 g/L)，l mL盐酸羟溶液(200 g/L)和2滴酚红指示液，用氨水(1+1)调至红色，再各加2 mL氰化钾溶液(100 g/L)，混匀。各加5.0 mL二硫腙使用液，剧烈振摇1 min，静置分层后，三氯甲烷层经脱脂棉滤入1cm比色杯中，以三氯甲烷调节零点于波长510 nm处测吸光度，各点减去零管吸收值后，绘制标准曲线或计算一元回归方程，样品与曲线比较。
计算
X=(m1-m2)*1000/m3*V2/V1*1000
式中：X——样品中铅含量，mg/kg(mg/L)；
m1——测定样品消化液中铅的质量，µg；
m2——试剂空白液中铅的质量，µg；
m3——样品质量(体积)，g(mL)；
V1——样品消化液的总体积，mL；
V2——测定用样品消化液的总体积，mL。
注意事项
①仪器清洗对测定结果影响很大，本实验所用玻璃仪器应使用10％～20%硝酸溶液浸泡过夜，用自来水反复冲洗，最后用去离子水冲洗干净。
②纯二硫腙(或其溶液)应在低温下(4～5℃)避光保存以免被氧化。
③用二硫腙法测定铅，溶液的pH值对其影响较大，应控制pH值在8.5～9.0范围内。
④二硫腙可与多种金属离子作用生成络合物。在pH一8.5～9.O时，加入氰化钾可以掩蔽cu2+、Hg2+、Zn2+等离子的干扰；注意氰化钾有剧毒。
⑤盐酸羟胺作为还原剂，保护二硫腙不被高价金属离子、过氧化物等氧化，加入盐酸羟胺还可排除Fe3+的干扰。
⑥柠檬酸铵是一种在广泛pH范围内有较强络合能力的掩蔽剂，加入柠檬酸铵的主要作用是络合钙、镁、铁等离子，防止生成氢氧化物沉淀使铅被吸附而受损失。
⑦所用试剂应尽可能做提纯处理。柠檬酸铵、二硫腙必须提纯，其余试剂可根据试剂等级或通过空白实验，再决定是否需要提纯
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上海美析仪器有限公司(以下简称美析)，是一家具有自主知识产权的高新技术企业，美析的创业理念“科技——因你改变”，并以此为企业宗旨，不断探究、果敢创新。特别是在分析测试仪器领域，不断开发出先进的产品，使美析成为优质仪器资源的供应者。
美析主营光谱类仪器可见分光光度计、紫外可见分光光度计、原子吸收光谱仪、超微量分光光度计、原子荧光光度计、ICP电感耦合等离子体发射光谱仪、ICP电感耦合等离子体质谱仪，目前，我们的产品已广泛应用于有机化学、无机化学、生物化学、医药、环保、冶金、石油、农业等领域。同时美析利用在产品机械结构、光学设计、电气应用和软件开发方面积累的丰富经验，结合市场的最新实际需求，近期将陆续推出一批全新的分析类仪器。
美析的总部及生产基地设在上海，营销中心设在北京，并在江苏、上海、山东三地建有研发基地。为充分利用各地的智力资源，美析与国内外的部分科研单位也进行了深层次的科研合作，不断将科研成果转化为生产力。为更好的服务于广大客户，美析仪器国内设有12家办事机构，度身定制符合您需求的应用解决方案，提高产品的附加值。在不断服务国内用户的同时，美析也与20多个国家的分销机构建立了深度的战略合作关系。
（美析仪器不仅仅只是一家高新技术认证企业，更通过了CE认证、FCC认证、RoHS认证以及国内多项资质审查认证，并有着多项自行研发的光谱类专利版权等等）
