苯酚-硫酸的分光光度法的应用方案

苯酚-硫酸的分光光度法的应用方案

原理

苯酚-硫酸试剂可与游离的或寡糖、多糖中的己糖、糖醛酸（或甲苯衍生物）起显色反应，己糖在490 nm处（戊糖及糖醛酸在480 nm）有最大吸收，吸收值与糖含量呈线性关系。

材料与仪器

美析UV-1500分光光度计

葡萄糖 浓硫酸 苯酚

试管 试管架 移液管 量筒 烧杯 离心管 玻璃碾磨器 离心机

步骤

1. 材料的处理:将0.5～1 g所测的材料捣碎，用适量蒸馏水、玻璃碾磨器碾磨并分次抽提，混合液离心得抽提液即样品液。

2. 标准曲线制作:取50 μg/ml的己糖标准溶液0 ml，0.1 ml，0.2 ml，0.3 ml，0.4 ml，0.5 ml于试管中，用水补足到0.5 ml，加0.3 ml 5%酚溶液，混匀后快速加入1.8 ml浓硫酸，振荡混匀，室温放置20  min即可出现橙黄色，以第一管调零点，可于490 nm处比色测定读OD 值。以糖含量为横坐标，相应的 OD 值为纵坐标，绘制标准曲线。

3. 样品含量测定:取0.5 ml内含2～25μg糖量，同样加入0.3 ml 5%酚溶液，混匀后立刻沿管壁加入浓硫酸1.8  ml，振荡混匀，达室温后，可测490 nm处的 OD 值，从标准曲线上查相应糖含量。

注意事项

1. 几种己糖测定方法中所使用的显色剂，如蒽酮、间苯二酚等，都需要沸水浴加热，而本法不需要，且蛋白质的存在对本法的显色反应影响不大，故也可用于糖蛋白中的己糖测定。除此之外，还可用于己糖甲基化衍生物和6－脱氧核糖、戊糖的测定。

2. 本法的热量来自浓硫酸与水的混合，因此加浓硫酸时反应快，且立即混匀，试管应大一些，以免烫手。

仪器参数

关于我们

上海美析仪器公司简介

上海美析仪器有限公司(以下简称美析)，是一家具有自主知识产权的高新技术企业，美析的创业理念“科技——因你改变”，并以此为企业宗旨，不断探究、果敢创新。特别是在分析测试仪器领域，不断开发出先进的产品，使美析成为优质仪器资源的供应者。

      美析主营光谱类仪器可见分光光度计、紫外可见分光光度计、原子吸收光谱仪、超微量分光光度计、原子荧光光度计、ICP电感耦合等离子体发射光谱仪、ICP电感耦合等离子体质谱仪，目前，我们的产品已广泛应用于有机化学、无机化学、生物化学、医药、环保、冶金、石油、农业等领域。同时美析利用在产品机械结构、光学设计、电气应用和软件开发方面积累的丰富经验，结合市场的最新实际需求，近期将陆续推出一批全新的分析类仪器。

美析的总部及生产基地设在上海，营销中心设在北京，并在江苏、上海、山东三地建有研发基地。为充分利用各地的智力资源，美析与国内外的部分科研单位也进行了深层次的科研合作，不断将科研成果转化为生产力。为更好的服务于广大客户，美析仪器国内设有12家办事机构，度身定制符合您需求的应用解决方案，提高产品的附加值。在不断服务国内用户的同时，美析也与20多个国家的分销机构建立了深度的战略合作关系。

（美析仪器不仅仅只是一家高新技术认证企业，更通过了CE认证、FCC认证、RoHS认证以及国内多项资质审查认证，并有着多项自行研发的光谱类专利版权等等）