水稻苗中苯丙氨酸解氨酶（PAL）的应用方案

水稻苗中苯丙氨酸解氨酶（PAL）的应用方案

引言苯丙氨酸解氨酶（PAD 对植物体的木质素、植保素、类黄酮、花青素等次生物质的形成起重要的调节作用，且与植物的抗病作用有一定的关系。本实验了解测定苯丙氨酸解氨酶活性的原理和方法。

关键词：苯丙氨酸解氨酶、美析紫外

原理苯丙氨酸解氨酶是植物次生代谢中的一个关键酶。它催化 L-苯丙氨酸的脱氨反应. 释放氨而形成反式肉桂酸。根据产物反式肉桂酸在波长 290 nm 处吸光度的变化，可以测定该酶的活性。

材料与仪器

UV-1800紫外可见分光光度计、冷冻高速离心机，旋涡混合器，恒温水浴锅等

材料：黄化水稻幼苗

试剂：0. 1 mol / L硼酸缓冲液（pH 8. 8）；0. 02 mol/ L 1 L-苯丙氨酸：称取3.33 g/ L-苯丙氨酸溶于1000 mL 0. 1 mol/L"1 硼酸缓冲液（pH 8. 8）；7 mmol - 統基乙醇硼酸 缓冲液：0. 11 mL 藐基乙醇用 0. 1 mol/L-1 硼酸缓冲液溶解，并定容至 200 mL；聚乙烯毗咯 烷酮（PVP）。

实验步骤

酶液制备：称取黄化水稻幼苗 0.5 g, 先加 1.5 mL 预冷的提取液（即 7 mmol - L-1 蔬 基乙醇硼酸缓冲液）、过量的聚乙烯毗咯烷酮（PVPX 但不能太多，否则不易研磨）、少量石英 砂在冰浴下研磨成浆，再加 3.5 mL 预冷的提取液使其终体积为 5 mL。于 12 000 g 4°C 下离心15 min, 用吸管吸取上清液，即粗酶液。

酶活测定：

反应液包括：①0.02 mol - L_1 L-苯丙氨酸 1 mL；

②0.1 mol - L 1 硼酸缓冲液（pH 8. 8）2 mL；

③0.1 mL 粗酶液。

（对照以 0. 1 mL 疏基乙醇缓冲液代替酶液）

反应液用涡旋混合器混匀后立即在 290 nm 处测起始吸光度值，并精确计时。（每一样品 重复两组）将测定后的各管于 30 °C 水浴保温 30 min, 再于 290 nm 处测定各管的吸光度值。 本实验用UV-1800紫外可见分光光度计以每 30 min 在波长 290 nm 处吸光度值增加 0. 01 所需酶量为 1 个单位（U）。

苯丙氨酸解氨酶活性（U - g^-1鲜重）=

式中a 一测定时的酶液用量，mL；

V—酶液总体积，mL；

W—样品重，g。

（苯丙氨酸解氨酶活性也可以 U • mg^-1 蛋白表示. 蛋白质含量可用考马斯亮蓝 G-250 法测定，以牛血清白蛋白作标准）。

仪器参数

UV-1800PC双光束紫外可见分光光度计

仪器特点

* UV－1800系列采用双光束光学系统，成功实现了高精度和高可靠性测量的完美结合，可满足各种应用的要求，可用在生物研究、生物工业、药物分析、制药、教学研究、环保、食品卫生、临床检验、卫生防疫等领域

* 宽广的波长范围，可满足各个领域对波长范围的要求

* 全自动的设计理念，实现了最简单的测量手段

* 大规模集成电路的设计大大提高了系统的扩展性和可靠性

* 改良优化的光路设计、进口光源和接收器造就了系统高性能和高可靠性

* 丰富的测量方法，具有波长扫描、时间扫描、多波长测定、多阶导数测定（选）、双波长、三波长（选）DNA蛋白质测量（选）等多种测量方法，可满足不同测量的要求，并可在6英寸大屏幕上直接显示

* 根据用户的要求可选配单孔架、手动四连架、手动八连架、自动八连架、玻璃支架、试管架、1cm比色架、5cm比色架、10cm比色架等

* 测量数据可通过打印机输出，具有USB接口

* 可断电保存测量参数和数据，方便用户使用

* 可通过PC软件控制实现光谱扫描等更精确和灵活的测量要求

技术指标及基本参数

* 波长范围：190～1100nm

* 光谱带宽：1.8nm

* 波长准确度：±0.3nm

* 波长重现性：≤0.1nm

* 透射比准确度: ±0.3% τ（0-100%τ）±0.002A(0～0.5A)   ±0.003A(0.5A～1A)

* 透射比重复性：±0.15% τ（0-100%τ）±0.001A(0～0.5A)   ±0.0015A(0.5A～1A)

* 杂散光：≤0.03% τ (220nm NaI，340nm NaNO2)

* 稳定性： 0.0005A/h（500nm预热后）

* 测光方式：透过率、吸光度、浓度、能量

* 波长调节：自动调节

* 光度范围： -4～4A

* 显示方式：六英寸高亮度液晶显示屏

* 检测器：进口硅光二极管

* 光源：进口氘灯，进口钨灯

* 电源： AC 220V/50Hz或110V/60Hz

* 功率： 120W

* 仪器尺寸：560×450×230mm

* 主机净重： 28Kg

关于我们

上海美析仪器公司简介

上海美析仪器有限公司(以下简称美析)，是一家具有自主知识产权的高新技术企业，美析的创业理念“科技——因你改变”，并以此为企业宗旨，不断探究、果敢创新。特别是在分析测试仪器领域，不断开发出先进的产品，使美析成为优质仪器资源的供应者。

      美析主营光谱类仪器可见分光光度计、紫外可见分光光度计、原子吸收光谱仪、超微量分光光度计、原子荧光光度计、ICP电感耦合等离子体发射光谱仪、ICP电感耦合等离子体质谱仪，目前，我们的产品已广泛应用于有机化学、无机化学、生物化学、医药、环保、冶金、石油、农业等领域。同时美析利用在产品机械结构、光学设计、电气应用和软件开发方面积累的丰富经验，结合市场的最新实际需求，近期将陆续推出一批全新的分析类仪器。

美析的总部及生产基地设在上海，营销中心设在北京，并在江苏、上海、山东三地建有研发基地。为充分利用各地的智力资源，美析与国内外的部分科研单位也进行了深层次的科研合作，不断将科研成果转化为生产力。为更好的服务于广大客户，美析仪器国内设有12家办事机构，度身定制符合您需求的应用解决方案，提高产品的附加值。在不断服务国内用户的同时，美析也与20多个国家的分销机构建立了深度的战略合作关系。

（美析仪器不仅仅只是一家高新技术认证企业，更通过了CE认证、FCC认证、RoHS认证以及国内多项资质审查认证，并有着多项自行研发的光谱类专利版权等等）