二氢硫辛酰胺的氧化反应实验应用方案

二氢硫辛酰胺的氧化反应实验应用方案

原理

硫辛酰胺+NADH+H+

此可逆反应可以从任一方向检测。氧化型硫辛酸和其氨基化合物是可以购买到的，但是利用简单的步骤就可使其还原。硫辛酸和其氨基化合物都可作为底物，有氨基存在，此酶的活性要强5倍。

材料与仪器

酶样品

磷酸钾 NAD DTE DL-二氢硫辛酰胺

美析UV-1800CPC双光束紫外可见分光光度计

实验步骤

0.96 ml 实验混合物(95mmol/L磷酸钾、NAD  1mmol/L、DTE  0.4mmol/L)

0.02 ml 0.2 mol/L DL-二氢硫辛酰胺 4.0 mol/L

0.02 ml 酶样品

开始加入 0.01 ml 0.1 mmol/L H₂O₂ 溶液,30℃ 时，于340 nm 处吸收值发生变化，

ε340＝6.3×103 l/（mol·cm）。

注意事项

试剂：

0.1 mol/L 磷酸钾，pH7.5

0.1 mol/L NAD（游离酸，Mr＝663.4；663 mg 溶于 10 ml 水中）

0.1 mol/L DTE（二硫赤藓糖醇，Mr＝154.2；或二硫苏糖醇，DTT，Mr＝154.2；154 mg 溶于 10 ml 水中）

0.2 mol/L DL-二氢硫辛酰胺（Mr＝207.3；52 mg溶于1.25 ml乙醇或者丙酮。原料溶液浓度的二氢硫辛酰胺不可溶于水中，而且不可溶于酒精。存在醇脱氢酶时，例如天然的乙醇可以与NAD反应形成乙醛和NADH，因此必须排除这个酶的活性，若两者选一，底物必须溶解于丙酮溶液中）。

仪器参数

UV-1800CPC双光束紫外可见分光光度计

仪器特点

*主机中文操作系统，10英寸彩色触摸屏显示

* UV－1800系列采用双光束光学系统，成功实现了高精度和高可靠性测量的完美结合，可满足各种应用的要求，可用在生物研究、生物工业、药物分析、制药、教学研究、环保、食品卫生、临床检验、卫生防疫等领域

* 宽广的波长范围，可满足各个领域对波长范围的要求

* 全自动的设计理念，实现了最简单的测量手段

* 大规模集成电路的设计大大提高了系统的扩展性和可靠性

* 改良优化的光路设计、进口光源和接收器造就了系统高性能和高可靠性

* 丰富的测量方法，具有波长扫描、时间扫描、多波长测定、多阶导数测定（选）、双波长、三波长（选）DNA蛋白质测量（选）等多种测量方法，可满足不同测量的要求

* 根据用户的要求可选配单孔架、手动四连架、手动八连架、自动八连架、玻璃支架、试管架、1cm比色架、5cm比色架、10cm比色架等

*支持外接U盘存储及传输实验数据

* 可断电保存测量参数和数据，方便用户使用

* 支持蓝牙连接功能，打印和输出数据，双平台操作系统，外接10英寸平板电脑，方便客户使用；

* 可通过PC软件控制实现光谱扫描等更精确和灵活的测量要求

技术指标及基本参数

*光路结构：C-T式 平行双光束

* 波长范围： 190～1100nm

* 光谱带宽： 1.8nm

* 波长准确度：±0.3nm

* 波长重现性：≤0.1nm

* 透射比准确度: ±0.3% τ（0-100%τ）±0.002A(0～0.5A)   ±0.003A(0.5A～1A)

* 透射比重复性：±0.15% τ（0-100%τ）±0.001A(0～0.5A)   ±0.0015A(0.5A～1A)

* 杂散光：≤0.02% τ (220nm NaI，340nm NaNO2)

* 稳定性： 0.0005A/h（500nm预热后）

* 测光方式：透过率、吸光度、浓度、能量

* 波长调节：自动调节

* 光度范围： -4～4A

* 显示方式：10英寸彩色触摸屏

* 检测器：进口硅光二极管

* 光源：进口氘灯，进口钨灯

* 电源： AC 220V/50Hz或110V/60Hz

* 功率： 120W

* 仪器尺寸：560×450×230mm

* 主机净重： 28Kg

关于我们

上海美析仪器公司简介

上海美析仪器有限公司(以下简称美析)，是一家具有自主知识产权的高新技术企业，美析的创业理念“科技——因你改变”，并以此为企业宗旨，不断探究、果敢创新。特别是在分析测试仪器领域，不断开发出先进的产品，使美析成为优质仪器资源的供应者。

      美析主营光谱类仪器可见分光光度计、紫外可见分光光度计、原子吸收光谱仪、超微量分光光度计、原子荧光光度计、ICP电感耦合等离子体发射光谱仪、ICP电感耦合等离子体质谱仪，目前，我们的产品已广泛应用于有机化学、无机化学、生物化学、医药、环保、冶金、石油、农业等领域。同时美析利用在产品机械结构、光学设计、电气应用和软件开发方面积累的丰富经验，结合市场的最新实际需求，近期将陆续推出一批全新的分析类仪器。

美析的总部及生产基地设在上海，营销中心设在北京，并在江苏、上海、山东三地建有研发基地。为充分利用各地的智力资源，美析与国内外的部分科研单位也进行了深层次的科研合作，不断将科研成果转化为生产力。为更好的服务于广大客户，美析仪器国内设有12家办事机构，度身定制符合您需求的应用解决方案，提高产品的附加值。在不断服务国内用户的同时，美析也与20多个国家的分销机构建立了深度的战略合作关系。

（美析仪器不仅仅只是一家高新技术认证企业，更通过了CE认证、FCC认证、RoHS认证以及国内多项资质审查认证，并有着多项自行研发的光谱类专利版权等等）